Untersuchungen zur Eignung von plasmidtransfizierten antigenpräsentierenden Zellen zur Reaktivierung tuberkulosespezifischer T-Helferzellen

Item type:	Thesis of the University of Regensburg (PhD)
Open Access Type:	Primary Publication
Date:	23 May 2013
Referee:	PD Dr. Ludwig Deml
Date of exam:	26 March 2013
Institutions:	Medicine > Lehrstuhl für Medizinische Mikrobiologie und Hygiene
Keywords:	Tuberkulose, Transfektion, Immunologie, tuberculosis, transfection, immunology, t-cell diagnostics, expansion
Dewey Decimal Classification:	600 Technology > 610 Medical sciences Medicine
Status:	Published
Refereed:	Yes, this version has been refereed
Created at the University of Regensburg:	Yes
Item ID:	28228

Abstract (German)

Die Arbeitsgruppe von PD Dr. Ludwig Deml befasst sich in einem Forschungsvorhaben unter Einsatz ihrer proprietären Reversen T-Zell-Technologie (RTT) mit der Entwicklung neuer Diagnostikprodukte zur Bestimmung aktiver mikrobieller Infektionen. Dieses Verfahren beruht auf der Bestimmung von Reifungsprozessen, welche in Antigen-präsentierenden Zellen (APC) infolge einer epitopspezifischen ...

Abstract (German)

Die Arbeitsgruppe von PD Dr. Ludwig Deml befasst sich in einem Forschungsvorhaben unter Einsatz ihrer proprietären Reversen T-Zell-Technologie (RTT) mit der Entwicklung neuer Diagnostikprodukte zur Bestimmung aktiver mikrobieller Infektionen. Dieses Verfahren beruht auf der Bestimmung von Reifungsprozessen, welche in Antigen-präsentierenden Zellen (APC) infolge einer epitopspezifischen Interaktion mit einer aktivierten T-Helferzelle hervorgerufen werden. Aktivierte T-Helferzellen treten transient während der aktiven Phase einer Infektion auf und stellen somit einen interessanten neuen Biomarker für den Nachweis aktiver Infektionen dar.
Im Rahmen dieses Projektes sollte am Beispiel der Tuberkulose untersucht werden, ob die Transfektion von Expressionsvektoren, welche für mit ER- und endosomalen Translokationssignalen ausgestattete chimäre Proteine kodieren, eine geeignete Strategie zur Epitopbeladung von MHC-Klasse-II Molekülen auf APC und insbesondere B-Zellen darstellt. Dieses Verfahren sollte bezüglich der Präsentationseffizienz zudem mit der Inkubation von PBMC bzw. Vollblut mit löslichen Proteinen verglichen werden.
Zur funktionellen Bestimmung der Präsentation von Epitopen des ESAT-6 bzw. CFP-10 Proteins auf MHC-Klasse-II-Molekülen in transfizierten PBMC wurde ein Zellkultursystem etabliert, dass auf der Kokultivierung von mit den etablierten Expressionsplasmiden transfizierten APC mit autologen, ex vivo expandierten ESAT-6/ CFP-10 spezifischen T-Helferzellen beruht. Dazu wurden durch eine repetitive Stimulation mit autologen ESAT-6/ CFP-10 Fusionsprotein beladenen PBMC T-Zellkulturen etabliert, welche bis zu 25 % ESAT-6/ CFP-10-spezifische T-Helferzellen enthielten. Der Anteil spezifischer T-Helferzellen wurde anhand deren IFN-γ Produktion bestimmt.

Translation of the abstract (English)

The research group around PD Dr. Ludwig Deml has been working on their proprietary reverse t-cell technology in order to develop new diagnostic products for detection of active microbial infections. This method is based on the detection of maturation processes in antigen presenting cells (APC) due to epitopspecific interactions with activated helper t-cells. Activated helper t-cells transiently ...

Translation of the abstract (English)

The research group around PD Dr. Ludwig Deml has been working on their proprietary reverse t-cell technology in order to develop new diagnostic products for detection of active microbial infections. This method is based on the detection of maturation processes in antigen presenting cells (APC) due to epitopspecific interactions with activated helper t-cells. Activated helper t-cells transiently appear during the active phase of an infection and therefore represent an interesting new biomarker for detection of acute infections.
In this project we investigated the ability to load MHC-II-molecules on APC and especially b-cells via transfection of expression vectors. These plasmids were carrying the sequences of proteins of the mycobacterium tuberculosis complex as well as endoplasmatic reticulum and endosomal translocation signals in order to force the protein into the MHC-II-molecule pathway for endosomal molecules. The efficacy of epitop presentation using this method was compared to the common procedure of incubation of PBMC or whole blood with soluble proteins.
For functional analysis of the epitop presentation of transfected APC a cell culture system of autogenic ex vivo expanded antigen specific t-helper-cells was established. Transfected APC were co-cultivated with the antigen specific THC culture, the fraction of antigen specific t-helper-cells recognizing their antigen was determined by their IFN-γ production.

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