Inhalt:
Proteinstrukturbestimmung mittels NMR-Spektroskopie 1
Automatisierte Auswertung von NMR-Spektren 2
Chemotaxis 3
Sensorisches System von E. coli 3
Sensorisches System von S. meliloti 7
Material und Methoden 13
Automatisierte Verarbeitung von NMR-Spektren 13
Proteinanalyse 13
SDS Page 13
Western Blotting 14
Bradford 14
Zellanzucht, Expression von CheY2 14
Zellaufschluß, Reinigung von CheY2 15
Phosphorylierung und Beryllofluoridierung 16
CheY1, CheA174-316 (P2), MotD 18
NMR-Proben 18
NMR-Experimente 19
Tripelresonanz-Experimente 19
Zuordnung
NOESY-Spektren 21
Wasserstoffbrücken 22
Protein-Wechselwirkungen 23
31P-Messungen 24
Chemische Verschiebung 26
Chemische Verschiebungsänderung 27
NOE-Zuordnung 27
Strukturrechnung 28
Automatisierte Vorverarbeitung von NMR-Spektren 33
Rauschniveau in NMR-Spektren 33
Niveau für die Signalsuche 34
Signalklassifizierung 35
Expressionsprotokoll für 15N/13C-Markierung 36
Reinigung von CheY2 38
Strukturbestimmung 38
CheY2-BeF3 38
Sequentielle Zuordnung 39
Sekundärstruktur 42
Dihedrale Winkel 44
Wasserstoffbrücken 44
NOESY-Spektren 45
Tertiärstrukturen von CheY2 und CheY2-BeF3 46
Strukturvergleich von CheY2 mit CheY2-BeF3 51
Protein- Wechselwirkungen 56
Wechselwirkung von CheY2 mit P2 56
Wechselwirkung von CheY2-BeF3 mit P2 59
Wechselwirkung von CheY2 mit CheY1 und MotD 61
CheY2-V107W 63
CheY2-D14K 64
CheY2-N60R 65
Phosphorylierungskinetik 67

Contents
NMR structure determination 1
Automated evaluation of NMR spectra 2
Chemotaxis 3
Sensoric system of E. coli 3
Sensoric system of S. meliloti 7
Material and methods 13
Automated analysis of NMR-spekctra 13
SDS Page 13
Western Blotting 14
Bradford Assay 14
Expression of CheY2 14
Purification of CheY2 15
Phosphorylation und beryllofluoridation 16
CheY2-BeF3 17
CheY1, CheA174-316 (P2), MotD 18
NMR samples 18
NMR experiments 19
Assingnment (main chain) 20
Assingnment (side chains) 20
NOESY spektra 21
Hydrogen bonds 22
Protein interactions 23
31P experiments 24
Chemical shift 26
NOE assignment 27
Molecular dynamics 28
Structure calculation 30
Automated analysis of NMR-Spektra 33
Local und global noise levels NMR-Spektra 33
Level for automated peak picking 34
Signal classification 35
Biochemistry 36
Expression of 15N/13C labeled protein 36
Purification of CheY2 38
Structure determination 38
CheY2-BeF3 38
Sequential assignment 39
Secondary structure 42
Dihedral angles 44
Hydrogen bonds 44
NOESY-Spectra 45
Tertiary structures of CheY2 and CheY2-BeF3 46
Comparison of the CheY2 and CheY2-BeF3 structures 51
Protein interactions 56
Interaction of CheY2 with P2 56
Interaction of CheY2-BeF3 P2 59
Interaction of CheY2 with CheY1 and MotD 61
CheY2-V107W 63
CheY2-D14K 64
CheY2-N60R 65
Kinetics of phosphorylation 67