Zielsetzung der vorliegenden Arbeit war die Charakterisierung von zirkulierenden Endothelzellen (CEC) direkt aus dem Vollblut von Patienten der Herz-/Thorax-Chirurgie. Auf der Grundlage einer bereits etablierten Methode zum diagnostischen Nachweis (Quantifizierung, Zeitverlauf) sollte mithilfe durchflusszytometrischer Analysen eine multiparametrische Charakterisierung über endotheliale Marker der Zellen ermöglicht werden.

Methoden: Verwendung eines Testsystems aus Vollblutproben gesunder Probanden, gespikt mit ausdifferenzierten humanen Endothelzellen (HUVEC), zur Etablierung der Methode. Erythrozytenlyse, Dichtegradientenzentrifugation, Zellsortierung mit magnetischen Partikeln (DynaBeads Pan Mouse IgG, Cellection Pan Mouse IgG Kit, BD Imag Anti-MausIgG1 Particles-DM, MACS-System), Zellkultivierung.

Ergebnisse: 1) Erfolgreiche Anreicherung von Endothelzellen (HUVEC) aus einer Vollblutprobe mit Ammoniumchloridlyse bzw. Dichtegradientenzentrifugation mit nicht ausreichender Reinheit. 2) Alleinige Verwendung der Marker UEA1 bzw. CD146 zur Endothelzell-Definition nicht geeignet. 3) Separation von Endothelzellen (HUVEC) aus Vollblut/einer gemischten Zellsuspension in gewünschter Weise mit folgenden immunomagnetischen Zellseparationsmethoden bei HTC-Patienten nicht möglich: Cellection Pan Mouse IgG, BD Imag Anti-MausIgG1 Particles-DM, Depletion mit dem MACS-System. 4) Erfolgreiche Separation der Endothelzellen (HUVEC) durch Positiv-Selektion mit dem MACS-System. 5) Isolierung von zirkulierenden Endothelzellen aus dem Vollblut von herzchirurgischen Patienten durch Positiv-Selektion mit dem MACS-System nicht möglich. 6) Einzeitige Färbung der CEC im Patientenvollblut mit Anti-CD31, Anti-CD34, Anti-CD45, Anti-CD146 und Erythrozytenlyse erlaubt Anreicherung der CEC und durchflusszytometrische Analyse. 7) Kultivierung der CEC aus Patientenvollblut gelingt nach Dichtegradientenzentrifugation und ermöglicht nach TNF-Aktivierung die Identifizierung und Charakterisierung der CEC mittels Zellmarkierung mit Anti-E-Selektin, Anti-CD31, Anti-CD34, Anti-CD146 und durchflusszytometrischer Analyse.