Isolierung und Charakterisierung von zirkulierenden Endothelzellen aus Patientenproben bei Operation mit extrakorporaler Zirkulation

URN to cite this document:: urn:nbn:de:bvb:355-opus-11589
DOI to cite this document:: 10.5283/epub.12227

Hagemeister, Eva

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Date of publication of this fulltext: 04 Mar 2009 13:39

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Item type:	Thesis of the University of Regensburg (PhD)
Date:	3 March 2009
Referee:	Karla (PD Dr.) Lehle
Date of exam:	10 December 2008
Institutions:	Medicine > Lehrstuhl für Herz-, Thorax- und herznahe Gefäßchirurgie
Keywords:	Isolierung <Medizin> , Charakterisierung , Bypassoperation , Endothelzelle , Extrakorporaler Kreislauf , zirkulierende , Endothelzellen , Progenitorzellen , CEC , EPC , Methoden , isolation , characterization , endothelial , circulating , cec
Dewey Decimal Classification:	600 Technology > 610 Medical sciences Medicine
Status:	Published
Refereed:	Yes, this version has been refereed
Created at the University of Regensburg:	Yes
Item ID:	12227

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Abstract (German)

Abstract (German)

Zielsetzung der vorliegenden Arbeit war die Charakterisierung von zirkulierenden Endothelzellen (CEC) direkt aus dem Vollblut von Patienten der Herz-/Thorax-Chirurgie. Auf der Grundlage einer bereits etablierten Methode zum diagnostischen Nachweis (Quantifizierung, Zeitverlauf) sollte mithilfe durchflusszytometrischer Analysen eine multiparametrische Charakterisierung über endotheliale Marker der Zellen ermöglicht werden.

Methoden: Verwendung eines Testsystems aus Vollblutproben gesunder Probanden, gespikt mit ausdifferenzierten humanen Endothelzellen (HUVEC), zur Etablierung der Methode. Erythrozytenlyse, Dichtegradientenzentrifugation, Zellsortierung mit magnetischen Partikeln (DynaBeads Pan Mouse IgG, Cellection Pan Mouse IgG Kit, BD Imag Anti-MausIgG1 Particles-DM, MACS-System), Zellkultivierung.

Ergebnisse: 1) Erfolgreiche Anreicherung von Endothelzellen (HUVEC) aus einer Vollblutprobe mit Ammoniumchloridlyse bzw. Dichtegradientenzentrifugation mit nicht ausreichender Reinheit. 2) Alleinige Verwendung der Marker UEA1 bzw. CD146 zur Endothelzell-Definition nicht geeignet. 3) Separation von Endothelzellen (HUVEC) aus Vollblut/einer gemischten Zellsuspension in gewünschter Weise mit folgenden immunomagnetischen Zellseparationsmethoden bei HTC-Patienten nicht möglich: Cellection Pan Mouse IgG, BD Imag Anti-MausIgG1 Particles-DM, Depletion mit dem MACS-System. 4) Erfolgreiche Separation der Endothelzellen (HUVEC) durch Positiv-Selektion mit dem MACS-System. 5) Isolierung von zirkulierenden Endothelzellen aus dem Vollblut von herzchirurgischen Patienten durch Positiv-Selektion mit dem MACS-System nicht möglich. 6) Einzeitige Färbung der CEC im Patientenvollblut mit Anti-CD31, Anti-CD34, Anti-CD45, Anti-CD146 und Erythrozytenlyse erlaubt Anreicherung der CEC und durchflusszytometrische Analyse. 7) Kultivierung der CEC aus Patientenvollblut gelingt nach Dichtegradientenzentrifugation und ermöglicht nach TNF-Aktivierung die Identifizierung und Charakterisierung der CEC mittels Zellmarkierung mit Anti-E-Selektin, Anti-CD31, Anti-CD34, Anti-CD146 und durchflusszytometrischer Analyse.

Translation of the abstract (English)

Objective: Characterization of circulating endothelial cells (cec) from peripheral blood of patients undergoing heart operations. Multiparametric characterization of cec using fluorescence activated cell sorting (facs) was aimed.

Investigated methods: erythrocyte lysis, density gradient centrifugation, immunomagnetic cell sorting (DynaBeads Pan Mouse IgG, Cellection Pan Mouse IgG Kit, BD Imag Anti-MausIgG1 Particles-DM, MACS-System), cell culture.

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