In der vorliegenden Dissertation wurde die Expression der Krüppel-like Faktoren (KLF) während der Differenzierung mononukleärer Zellen untersucht. Durch RT-PCR wurden Expressionsprofile der KLF 1,2,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13 in Monozyten (MO), Makrophagen (MAK), unstimulierten Dendritischen Zellen (DC) und stimulierten DC angefertigt. Eine deutliche Regulation während der Differenzierung konnte ...
Abstract (German)
In der vorliegenden Dissertation wurde die Expression der Krüppel-like Faktoren (KLF) während der Differenzierung mononukleärer Zellen untersucht. Durch RT-PCR wurden Expressionsprofile der KLF 1,2,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13 in Monozyten (MO), Makrophagen (MAK), unstimulierten Dendritischen Zellen (DC) und stimulierten DC angefertigt. Eine deutliche Regulation während der Differenzierung konnte dabei für KLF2, KLF4, KLF5, KLF6, KLF7, KLF8, KLF11 und KLF12 gezeigt werden. KLF6, KLF8 und KLF12 wurden zusätzlich proteinchemisch mittels Gelelektrophorese und Westernblot nachgewiesen. Übereinstimmend mit den Ergebnissen der RT-PCR konnte folgendes gezeigt werden: 1. Der Zellzyklussupressor KLF6 wird in MO deutlich stärker exprimiert als in MAK. 2. KLF8 weist ein besonderes Expressionsmuster auf mit geringer Expression in MO und deutlich stärker in MAK und DC. Alle anderen untersuchten KLF haben eine deutlich höhere Expression in MO als in den ausdifferenzierten MAK und DC. 3. Die deutlichste Regulation während der Differenzierung mononukleärer Zellen weist KLF12 auf. KLF12 wird in MAK nicht exprimiert, in MO hingegen stark, daneben weisen jedoch auch lymphozytäre Zellen eine deutliche KLF12 Expression auf. Zum näheren Verständnis der transkriptionellen Regulation wurde anschließend der Einfluss der KLF6 und KLF8 auf die Expression von MADDAM untersucht. Die stärkste Regulation in den Transfektionsversuchen war für KLF 8 durch Verwendung des 150 bp langen proximalen Promotors zu erreichen. Bei KLF6 hingegen konnte mit einem 450 bp Fragment eine weitere Aktivitätssteigerung im Vergleich zum kürzeren 150 bp Fragment beobachtet werden. Es wurde bereits in anderen Arbeiten gezeigt, dass die typischen GC-Boxen, die als Hauptbindungsstelle der KLF gelten, alle innerhalb des 150 bp Promotors liegen. Für den Genrepressor KLF8 scheinen diese Bindungsstellen entscheidend zu sein. Für KLF6 müssen hingegen weitere Bindungsstellen, außerhalb der klassischen proximalen Promotorregion, vorhanden sein. Darüber hinaus konnte gezeigt werden, dass die Expression von MADDAM in mononukleären Zellen der Expression von KLF6 tendenziell sehr ähnlich ist. Außerdem wurde bewiesen, dass KLF6 den MADDAM Promotor aktivieren kann. Der Transkriptionsfaktor KLF6 könnte deshalb eine wichtige Bedeutung für die Hochregulation von MADDAM haben.
Zusammengefasst zeigte die vorliegende Arbeit, dass eine deutliche Regulation der KLF Transkriptionsfaktoren während der Differenzierung mononukleärer Zellen stattfindet. Den Stellenwert, den die veränderte Expression der KLF-Transkriptionsfaktoren dabei für die Differenzierung mononukleärer Zellen einnimmt, werden weitere Untersuchungen klären müssen.
Translation of the abstract (English)
The topic of this dissertation was the influence of KLF transcription factors in monocyte differentiation. Via RT-PCR was shown that KLF2, KLF4, KLF5, KLF6, KLF7, KLF8, KLF11 and KLF12 are particularly regulated during monocyte differentiation.
Furthermore the expression of KLF6, KLF8 and KLF12 in monocytes compared to macrophages and dendritic cells was verified using Western blot ...
Translation of the abstract (English)
The topic of this dissertation was the influence of KLF transcription factors in monocyte differentiation. Via RT-PCR was shown that KLF2, KLF4, KLF5, KLF6, KLF7, KLF8, KLF11 and KLF12 are particularly regulated during monocyte differentiation. Furthermore the expression of KLF6, KLF8 and KLF12 in monocytes compared to macrophages and dendritic cells was verified using Western blot technology. In addition in transfection trials could be shown that KLF 6 can especially activate the 450bp MADDAM promotor whereas KLF8 represses the 150bp promotor. Therefore KLF6 activation of MADDAM also needs cofactors, because the typical GC-boxes binding KLF-factors are all within the 150bp promotor.
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