Zusammenfassung (Deutsch)
STIC Zellen sind monozytäre Zellen, die in vitro und in vivo immunsuppressive Fähigkeiten besitzen. So führen sie in Cokulturen mit Lymphozyten zu einem Rückgang der Lymphozyten Zellzahl. Außerdem kommt es in den STIC Kulturen zu einer Anreicherung von regulatorischen T-Zellen.
Ziel der vorliegenden Arbeit war es, STIC Zellen näher im Bezug auf ihr Zytokin- und Genexpressionsprofil zu ...
Zusammenfassung (Deutsch)
STIC Zellen sind monozytäre Zellen, die in vitro und in vivo immunsuppressive Fähigkeiten besitzen. So führen sie in Cokulturen mit Lymphozyten zu einem Rückgang der Lymphozyten Zellzahl. Außerdem kommt es in den STIC Kulturen zu einer Anreicherung von regulatorischen T-Zellen.
Ziel der vorliegenden Arbeit war es, STIC Zellen näher im Bezug auf ihr Zytokin- und Genexpressionsprofil zu charakterisieren. Dadurch sollte dieser Zelltyp besser definiert werden und Hinweise auf dessen immunmodulatorischen Wirkmechanismus gefunden werden.
Dazu wurden Zellkulturen der STIC Zellen mit Hilfe von ELISA Assays auf die Zytokine IL-2, IL-4, IL-10, IL-12, IFN-γ und TGF-β untersucht. Dabei zeigte sich, dass die Zytokine IL-2, IL-10 und TGF-β in den STIC Kulturen gebildet werden. Um unsere Hypothese zu überprüfen, dass IL-10 für die in den Zellkulturen beobachtete Anreicherung von regulatorischen T-Zellen verantwortlich ist, führten wir die STIC Zellkulturen mit Zellen von IL-10 knockout Mäusen durch. Unsere Ergebnisse zeigen, dass IL-10 für die Anreicherung der Treg Zellen keine Rolle spielt.
Um zusätzliche potentiell immunologisch bedeutsame Proteine der STIC Zellen zu identifizieren, haben wir einen RNA Microarray durchgeführt. Zur Auswertung haben wir die Daten nach Genexperssionswerten durchsucht, die bei den STIC Zellen im Vergleich zu unstimulierten und zu klassisch aktivierten Makrophagen entweder hoch- oder herunterreguliert sind und denen in der Literatur immunregulatorische Eigenschaften zugeschrieben werden. So vermuten wir bei den Proteinen NGP, S100a8, S100a9, MGL1, MGL2, PD-L2, Granzym B, GITRL und OX40L eine mögliche Beteiligung bei der Wirkung der STIC Zellen. Zusätzlich durchgeführte durchflusszytomtrische Untersuchungen auf die Proteine GITRL, OX40L, MGL1/2 haben ergeben, dass GITRL auf der Oberfläche der STIC Zellen nicht exprimiert wird, währenddessen OX40L eine schwache, MGL1/2 aber eine starke Expression zeigt.
Die von uns identifizierten Veränderungen der Genexperssion bei den STIC Zellen sind ein möglicher Anknüpfungspunkt für weitere Untersuchungen auf Proteinebene.
Übersetzung der Zusammenfassung (Englisch)
STIC cells are monocytes that show immunosuppressive abilities in vitro and in vivo. Lymphocytes cocultured with STICs decrease in numbers over time. Additionally an increase in regulatory T-cell numbers can be shown in these cultures.
This doctorate aims at characterizing the STIC cells regarding their cytokine- and gene expression profile to elucidate their immunomodulatory way of action.
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Übersetzung der Zusammenfassung (Englisch)
STIC cells are monocytes that show immunosuppressive abilities in vitro and in vivo. Lymphocytes cocultured with STICs decrease in numbers over time. Additionally an increase in regulatory T-cell numbers can be shown in these cultures.
This doctorate aims at characterizing the STIC cells regarding their cytokine- and gene expression profile to elucidate their immunomodulatory way of action.
For this purpose STIC cultures have been screened for the cytokines IL-2, IL-4, IL-10, IL-12, IFN-γ and TGF-β using ELISA Assays. IL-2, IL-10 and TGF-β secretion could be shown in the cultures. We hypothesized that the cytokine IL-10 could be responsible for the enrichment of regulatory T-cells in the cultures. To check this hypothesis we performed STIC cultures with IL-10 knockout cells. Contrary to expectations the results show that IL-10 is not responsible for the enrichment of regulatory T-cells.
In order to identify further potential relevant proteins of STIC cells, a RNA Microarray has been performed. Changes in the m-RNA expression of the STIC cells in comparison to unstimulated and classically activated macrophages were supposed to be detected. Such changes could be shown with the immunological meaningful proteins NGP, S100a8, S100a9, MGL1, MGL2, PD-L2, Granzym B, GITRL and OX40L. Consequently these proteins may play a role in the action of STIC cells. Additionally performed flow cytometrical analysis showed a MGL1/2 (strong) and OX40L (weak) expression on the surface of STIC cells, while no GIRTL expression was detected.
The identified changes in the gene expression profile of STIC cells should lead to further investigations of these substances on a protein level.
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