Es erfolgte die Entwicklung einer Methode, mit der man regulatorische T-Zellen nach IL-4 und FOXP3 sortieren und in Hinblick auf ihr Genexpressionmuster näher untersuchen kann. Diese Methode bietet nun die Möglichkeit, globale Expressionsmuster unterschiedlicher Differenzierungsstufen humaner Treg-Zellen zu untersuchen, um die Linienstabilität bzw. das Differenzierungspotential dieser Zellpopulation aufzuklären. Wichtige Parameter zur erfolgreichen Durchführung der Methode sind eine möglichst kurze Fixierungsdauer mit 0.25%-igem Paraformaldehyd und eine Permeabilisierung mit 70% Ethanol mit anschließender Färbung und zügiger durchflusszytometrischer Zellsortierung sowie eine Inkubation mit Lysepuffer für 1 Stunde bei 65°C vor der RNA-Extraktion mit Trizol.

We succeeded to develop a method to sort regulatory t-cells regarding IL-4 and FOXP3 and to analyze the gene expression patterns of the sorted subpopulations. This method now offers the possibility to analyze global expression patterns of human Treg cells in varying differentiation levels to elucidate the lineage stability and the differentiation potential of this cell population. Important parameters for a successful procedure of this new method are a fixation period with 0.25% Paraformaldehyd as short as possible and a permeabilisation with 70% ethanol followed by staining and uninterrupted cell sorting plus afterwards an incubation of the sorted cells with lysis buffer for 1 hour at 65°C before RNA extraction with Trizol.