Analyse einer Olfactomedin-1 (Pancortin) mutierter Maus mit Myocilin-Defizienz

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Götz, Markus (2018) Analyse einer Olfactomedin-1 (Pancortin) mutierter Maus mit Myocilin-Defizienz. PhD, Universität Regensburg.

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Date of publication of this fulltext: 08 Oct 2018 10:19

Abstract (German)

Abstract (German)

Hintergrund: Myocilin und Olfactomedin-1 sind Proteine der Olfactomedinfamilie,
deren Funktion weitestgehend ungeklärt ist. Myocilin-defiziente Mäuse besitzen
sowohl mehr Zellen in allen Retinaschichten als auch eine erhöhte Anzahl an Axonen
im N. opticus und zeigen eine geringere Ausprägung der Schädigung in etablierten
Schadensmodellen der Netzhaut. Mäuse, die eine mutierte Form von Olfactomedin-1
(Olfm1-mutant) bilden, werden hingegen vermehrt geschädigt.
Methoden: Durch Kreuzung von Myoc-/--Mäusen mit Olfm1-mutant Mäusen wurde
eine Myoc-/-/Olfm1-mutant Mauslinie generiert und durch PCR genotypisiert. Diese
wurde durch Untersuchungen anhand von Semidünnschnitten, TUNEL-Färbungen,
Lichtschaden, NMDA-Injektion und Realtime-PCR analysiert.
Ergebnisse: Myoc-/-/Olfm1-mutant Mäuse besitzen eine erhöhte Anzahl an
Photorezeptoren in der äußeren Körnerschicht. Da die Ursache hierfür im Ablauf des
ontogenetischen Zelltodes vermutet wurde, wurden TUNEL-Färbungen durchgeführt.
Diese zeigten eine erhöhte Anzahl an apoptotischen Zellen in der inneren
Körnerschicht zum Zeitpunkt P9 während in den anderen Retinaschichten kein
Unterschied bestand. Weitere Versuche mit Lichtschädigung und exzitatorischer
Schädigung durch NMDA-Injektion lieferten zudem keine Hinweise auf einen
Unterschied zwischen Myoc-/-/Olfm1-mutant Mäusen und Wildtyptieren bezüglich
des Ausprägungsgrads der Schädigung. Da dies durch Gegenregulation anderer
Olfactomedinproteine bedingt sein könnte, wurde durch quantitative Realtime-PCR
die Expression ausgewählter Vertreter der Olfactomedine untersucht. Dabei zeigte
sich tatsächlich eine vermehrte Expression an Latrophilin 1 (zum Zeitpunkt 8
Wochen), während jedoch Latrophilin 2 (zum Zeitpunkt 8 Wochen) und Olfactomedin
3 (zum Zeitpunkt P10), herrunterreguliert werden.
Schlussfolgerung: Myoc-/-/Olfm1-mutant Mäuse weisen einen vom Wildtyp
abweichenden Phäntotyp auf, der sich auch vom Phänotyp von Myoc-/- oder Olfm1-
mutant Mäusen der rein Myocilin defizienten oder Pancortin mutierten Tiere
unterscheidet. Somit besteht wahrscheinlich ein gegenseitiger Einfluss von Myocilin
und Olfactomedin-1. Ein Effekt durch den unterschiedlichen genetischen Hintergrund
kann nicht ausgeschlossen werden.

Translation of the abstract (German)

Background: Myocilin and Olfactomedin-1 are proteins of the olfactomedin family,
whose function has not been finally clarified. Myocilin-deficient mice have more cells
in all retinal layers, a higher number of axons in the optical nerve and show less
damage in established models of experimental retinal injury. Instead, mice that
synthetize a mutant form of Olfactomedin-1 (Olfm1-mutant), show increased damage.
Methods: Through crossbreeding of Myoc-/--mice with Olfm1-mutant mice a Myoc-/-
/Olfm1-mutant mouse line was generated and genotyped through PCR. This mouse
was analyzed by analysis of semi thin sections, TUNEL-stainings, light damage,
NMDA injection and realtime-PCR.
Results: Myoc-/-/Olfm1-mutant mice have an increased number of photoreceptors in
their outer nuclear layer (ONL) when compared to wildtype littermates. To follow up
on the hypothesis that changes in developmental cell death are responsible for this,
TUNEL-staining to check for apoptotic cell death was performed. An increased
number of apoptotic cells in the inner nuclear layer (INL) at postnatal day (P) 9 was
observed, but not in other layers of the retina. Further experiments using light
damage und excitatory damage through NMDA-injection did not indicate a different
vulnerability between Myoc-/-/Olfm1-mutant mice and wild type mice. To analyze a
possible influence on the regulation of other olfactomedin proteins, the expression of
some olfactomedin family members was analyzed through quantitative realtime-PCR
at different points. An increased expression of Latrophilin 1 (after 8 weeks) could be
shown while Latrophilin 2 (after 8 weeks) and Olfactomedin 3 (at P10) were down
regulated.
Conclusion: Myoc-/-/Olfm1-mutant mice show a phenotype different to that of
wildtype littermates, Myoc-/-- or Olfm1-mutant mice. The effects of mutant
Olfactomedin-1 appear to be different in a Myocilin-deficient background. A general
effect of the different genetic backgrounds cannot be excluded.

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Item type:	Thesis of the University of Regensburg (PhD)
Date:	8 October 2018
Referee:	Prof. Dr. E. R. Tamm
Date of exam:	20 September 2018
Institutions:	Biology, Preclinical Medicine > Institut für Anatomie > Lehrstuhl für Humananatomie und Embryologie Biology, Preclinical Medicine > Institut für Anatomie > Lehrstuhl für Humananatomie und Embryologie > Prof. Dr. Ernst Tamm
Keywords:	Olfactomedine, Retina, Myocilin, Pancortin
Dewey Decimal Classification:	600 Technology > 610 Medical sciences Medicine
Status:	Published
Refereed:	Yes, this version has been refereed
Created at the University of Regensburg:	Yes
Item ID:	37832