Die Rolle des Östrogenrezeptors β im endometrialen Adenokarzinom

Item type:	Thesis of the University of Regensburg (PhD)
Open Access Type:	Primary Publication
Date:	18 June 2019
Referee:	Prof. Dr. Oliver Treeck
Date of exam:	7 June 2019
Institutions:	Medicine > Lehrstuhl für Frauenheilkunde und Geburtshilfe (Schwerpunkt Frauenheilkunde)
Keywords:	Östrogenrezeptor β, Endometriumkarzinom, HEC-1-A, RL95-2, ERβ-Knockdown, Transkriptomanalyse, ERβ-Agonisten, ERβ-Antagonisten, Tamoxifen
Dewey Decimal Classification:	600 Technology > 610 Medical sciences Medicine
Status:	Published
Refereed:	Yes, this version has been refereed
Created at the University of Regensburg:	Yes
Item ID:	40367

Abstract (German)

Hintergrund Es wurde bisher gezeigt, dass Östrogenrezeptor β (ERβ) bei hormonabhängigen Tumoren wie Mamma-, Prostata- und Ovarialkarzinom als Tumorsuppressor wirkt. In dieser Arbeit wurde untersucht, welche Rolle der Rezeptor im Endometriumkarzinom spielt. Methoden In der Arbeit wurde am Beispiel von den Zelllinien HEC-1-A (ERα-negativ/ERβ-positiv) und RL95-2 (ERα-positiv/ERβ-positiv) die ...

Abstract (German)

Hintergrund
Es wurde bisher gezeigt, dass Östrogenrezeptor β (ERβ) bei hormonabhängigen Tumoren wie Mamma-, Prostata- und Ovarialkarzinom als Tumorsuppressor wirkt. In dieser Arbeit wurde untersucht, welche Rolle der Rezeptor im Endometriumkarzinom spielt.

Methoden
In der Arbeit wurde am Beispiel von den Zelllinien HEC-1-A (ERα-negativ/ERβ-positiv) und RL95-2 (ERα-positiv/ERβ-positiv) die Rolle von ERβ in endometrialen Adenokarzinomzellen untersucht. Das Hauptaugenmerk lag dabei auf dem Proliferationsverhalten der Zellen nach gezieltem Abschalten von ERβ. Dies erfolgte mittels Transfektion mit spezifischer siRNA. Die Zellproliferation wurde anschließend unter Verwendung des fluoreszierenden CellTiter-Blue® Cell Viability Assay von Promega (CTB®-Assay) bewertet. Die Analyse des Transkriptoms der Knockdown-Zellen erfolgte mittels GeneChip® Human Gene 2.0 (Affymetrix). Ebenfalls wurde mit Hilfe des CTB®-Assays die Zellproliferation nach Stimulation mit den ERβ-Antagonisten PHTPP und (R,R)-THC, den ERβ-Agonisten Liquiritigenin, ERB041 und WAY200070 und nach Stimulation mit Tamoxifen bewertet.

Ergebnisse
Das Abschalten von ERβ mittels siRNA-vermittelter Transfektion führte bei beiden Zelllinien zu einer signifikanten (p<0,05) Proliferationssteigerung. Auf molekularer Ebene konnte gezeigt werden, dass eine verminderte ERβ-Expression mit einer verstärkten Expression von proliferationsassoziierten Genen und Onkogenen einherging, sowie mit einer Unterdrückung von Genen, die u.a. mit Apoptose und Differenzierung assoziiert sind. Die Behandlung mit ERβ-Antagonisten PHTTP und (R,R)-THC konnte die Proliferation beider Zelllinien induzieren und bestätigte die Beobachtungen der Knockdown-Experimente. Die Ergebnisse der Versuchsreihen mit den ERβ-Agonisten waren widersprüchlich. Hier wirkte WAY200070 proliferationshemmend. Der bereits vorher beschriebene proliferationsfördernde Effekt von Tamoxifen auf die Endometriumkarzinomzellen konnte ebenfalls beobachtet werden. Diese Wirkung konnte durch WAY200070 teilweise aufgehoben werden.

Fazit
Der Großteil der Daten weist auf einen protektiven, tumorsupprimierenden Effekt von ERβ in den Karzinomzellen hin, wie es sich bereits in anderen endokrin aktiven Geweben gezeigt hat. Jedoch sind weitere Forschungen über die Rolle von ERβ im Endometriumkarzinom nötig, um dessen Wirkungsweise weiter abzusichern.

Translation of the abstract (English)

Background It has previously been shown that estrogen receptor β (ERβ) acts as a tumor suppressor in hormone-dependent cancer like breast cancer, prostate carcinoma and ovarian cancer. In this study, we intended to investigate the role of ERβ in endometrial cancer. Methods The role of ERβ was investigated applying two endometrial cancer cell lines, the ERα-negative/ERβ-positive line HEC-1-A ...

Translation of the abstract (English)

Background
It has previously been shown that estrogen receptor β (ERβ) acts as a tumor suppressor in hormone-dependent cancer like breast cancer, prostate carcinoma and ovarian cancer. In this study, we intended to investigate the role of ERβ in endometrial cancer.

Methods
The role of ERβ was investigated applying two endometrial cancer cell lines, the ERα-negative/ERβ-positive line HEC-1-A and the ERα-positive/ERβ-positive RL95-2. The main focus remained on the proliferation of the cancer cells after siRNA-mediated knockdown of ERβ. We used the fluorescent CellTiter-Blue® Cell Viability Assay (Promega) to assess the cell proliferation. Additionally, we performed transcriptome analyses by means of GeneChip® Human Gene 2.0 (Affymetrix).
We treated both cell lines with the ERβ antagonists PHTPP and (R,R)-THC, also with the ERβ agonists Liquiritigenin, ERB041 and WAY200070 and further with Tamoxifen to examine their effect on proliferation.

Results
Knockdown of ERβ significantly increased proliferation of HEC-1-A and RL95-2 (p<0,05). Transcriptome analysis revealed that siRNA-mediated knockdown of ERβ led to increased expression of oncogenes and proliferation-associated genes as well as repression of genes associated with apoptosis and differentiation. Treatment with ERβ antagonists induced cell proliferation of both cell lines confirming the observations of the knockdown experiments. Results after treatment with ERβ agonists have been conflicting. WAY200070 was able to reduce proliferation of endometrial cancer cells. Previously described proliferation-enhancing effect of Tamoxifen has been observed. This effect was reduced by WAY200070, but it did not change significantly.

Conclusions
Our data support the role of ERβ as tumor suppressor in endometrial carcinoma as assumed in studies on other endocrine active tissues. Further studies are needed to verify the role of ERβ in endometrial cancer.

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