PMNs wurden mit verschiedenen Konzentrationen von FKS, Ionomycin, CRP, Fibrinogen und Ferritin inkubiert und anschließend verschiedene Granulozytenfunktionalitäten mittels Durchflusszytometrie oder „Live-Cell-Imaging“ detektiert. Hierbei handelt es sich in der Durchflusszytometrie um den oxidativen Burst und die Expression der Oberflächenantigen CD11b, CD62L und CD66b. Das „Live-Cell-Imaging“ ...
Abstract (German)
PMNs wurden mit verschiedenen Konzentrationen von FKS, Ionomycin, CRP, Fibrinogen und Ferritin inkubiert und anschließend verschiedene Granulozytenfunktionalitäten mittels Durchflusszytometrie oder „Live-Cell-Imaging“ detektiert. Hierbei handelt es sich in der Durchflusszytometrie um den oxidativen Burst und die Expression der Oberflächenantigen CD11b, CD62L und CD66b. Das „Live-Cell-Imaging“ zeichnete das Migrationsverhalten, die ROS-Produktion und Intensität, die Freisetzung von MPO und die NET-Formation auf. Es wird gezeigt, dass ein FKS-Anteil von 10 % in dem Medium, in welches die PMNs nach der Isolation aufgenommen werden, zu einer längeren Aktivität der PMNs führt. Durch eine längere Aktivität der PMNs können diese besser untersucht werden. Ionomycin hat einen moderaten Einfluss auf die PMNs. Es führt zu einer vermehrten Expression von CD11b und CD66b und zu einer verminderten Expression von CD62L. Diese Arbeit zeigt außerdem, dass die Akute-Phase-Proteine CRP, Ferritin und Fibrinogen einen moderaten Einfluss auf die Granulozytenfunktionalität ausüben. CRP verstärkt die Intensität der ROS-Produktion. Ferritin führt zu einer mäßigen Steigerung der ROS-Produktion, insbesondere nach Aktivierung mit TNFα/fMLP oder PMA. Dies wurde mittels Durchflusszytometrie detektiert. Fibrinogen hat hauptsächlich Auswirkungen auf die Expression der Antigene CD11b, CD62L und CD66b. Diese Effekte auf die PMNs sind alle moderat und zeigen gewisse Tendenzen. Extreme Beeinflussungen konnten nicht festgestellt werden. Um die genaue Bedeutung der APPs in der Immunabwehr im Zusammenhang mit den PMNs zu verstehen, sollten zukünftig weitere Versuche zu diesem Thema durchgeführt werden. Das Verhalten der PMNs ist noch lange nicht verstanden und hält noch viele ungeklärte Fragen bereit. Beispielsweise könnte in den Versuchen FKS durch humanes Serum ersetzt, die Art der Granulozytenisolierung verändert oder die Auswirkung von weiteren APPs auf die PMNs untersucht werden.
Translation of the abstract (English)
PMNs were incubated with different concentrations of FCS, ionomycin, CRP, fibrinogen and ferritin and then various granulocyte functionalities were detected using flow cytometry or live cell imaging. In flow cytometry, these are the oxidative burst and the expression of the surface antigen CD11b, CD62L and CD66b. Live cell imaging recorded migration behavior, ROS production and intensity, MPO ...
Translation of the abstract (English)
PMNs were incubated with different concentrations of FCS, ionomycin, CRP, fibrinogen and ferritin and then various granulocyte functionalities were detected using flow cytometry or live cell imaging. In flow cytometry, these are the oxidative burst and the expression of the surface antigen CD11b, CD62L and CD66b. Live cell imaging recorded migration behavior, ROS production and intensity, MPO release and NET formation. It is shown that a FCS content of 10 % in the medium in which the PMNs are taken up after isolation leads to a longer activity of the PMNs. A longer activity of the PMNs allows them to be studied better. Ionomycin has a moderate influence on the PMNs. It leads to an increased expression of CD11b and CD66b and to a reduced expression of CD62L. This work also shows that the acute phase proteins CRP, ferritin and fibrinogen exert a moderate influence on granulocyte functionality. CRP increases the intensity of ROS production. Ferritin leads to a moderate increase in ROS production, especially after activation with TNFα/fMLP or PMA. This was detected by flow cytometry. Fibrinogen mainly affects the expression of the antigens CD11b, CD62L and CD66b. These effects on the PMNs are all moderate and show certain tendencies. Extreme influences could not be determined. To understand the exact significance of APPs in immune defense in connection with PMNs, further experiments on this topic should be carried out in the future. The behavior of PMNs is far from being understood and there are still many unanswered questions. For example, FCS could be replaced by human serum in the experiments, the type of granulocyte isolation could be changed or the effect of other APPs on the PMNs could be investigated.
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