Zielgerichtete Isolierung (immune capture) und Proteinprofilierung von tumorabgeleiteten Exosomen (TEX) im Plasma von Patienten mit Plattenepithelkarzinom der Kopf-, Hals-Region (HNSCC)

1. Entwicklung und Optimierung eines Verfahrens zur zielgerichteten Isolierung von tumorabgeleiteten Exosomen (TEX) und Nicht-TEX aus Plasma von Patienten mit Kopf-Hals-Plattenepithelkarzinom (HNSCC). Die vorgeschlagene Studie basiert auf umfangreichen vorklinischen Experimenten, welche die Durchführbarkeit der zielgerichteten Isolierung als Methode der Wahl für die Entdeckung von Biomarkern demonstrieren. Da kein monoklonaler Antikörper (mAb), welcher spezifisch an HNSCC-Tumorantigenen bindet, bekannt ist, werden mAb gegen überexprimierten Tumor-Ag zur Immunerfassung von TEX verwendet. In diesem Projekt soll eine Kombination aus drei verschiedenen Fang-Antikörpern (Abs) verwendet werden, basierend auf vorläufigen Ergebnissen, welche in der Arbeitsgruppe von Prof. Whiteside aktuell erhoben wurden. Es wurde bereits gezeigt, dass die Kombination von Anti-CSPG4-, Anti-B7H3- und CD44v3-mAbs, Ag erkennt, die von HNSCC-Zellen stark überexprimiert werden und die auch in von diesen Zellen produzierten Exosomen getragen werden. Daher stellen wir die Hypothese auf, dass die Kombination von Anti-CSPG-, Anti-B7-H3- und Anti-CD44v3-mAbs, welche alle drei verschiedenen Ags erkennen, die von HNSCC-Zellen überexprimiert und von aus Plasma stammenden HNSCC-Exosomen getragen werden, erfolgreich zur Isolierung von HNSCC abgeleiteten Exosomen aus Patientenplasma verwendet werden kann. 2. Verwendung der entwickelten Methodik zur zielgerichteten Isolierung von TEX und Nicht-TEX aus Plasma einer Kohorte von 25 HPV(+)- und 25 HPV(-)-Patienten mit HNSCC für die anschließende hochauflösende Massenspektrometrie (HRMS), um nach Proteinprofilen sowie viralen Antigenen, einschließlich E2 und E5 zu suchen, die TEX charakterisieren 3. Untersuchung des phänotypischen und funktionellen Einflusses der separierten Exosom-Fraktionen auf CD8+ T-Zellen und NK-Zellen wird ebenfalls durchgeführt.