Four different monoclonal rat anti mouse lymphotoxin beta-receptor (mLTbetaR) antibodies were generated in order to study the expression patterns and molecular mechanisms that follow the activation of this receptor which belongs to the TNFR superfamily. One of these four antibodies, namely 1C5, cross-reacts with a protein on thymocytes of wildtype and LTbetaR-/- mice. Since thymocytes do not express the LTbetaR a similar receptor which might complement the LTbetaR on these cells was expected to be found.
On the way to identify the unknown protein the epitope of the antibody 1C5 was narrowed down to the first twelve amino acids of the mature mLTbetaR. None of the other members of the TNFR superfamily contains this epitope. Homology searches led to a long list of matching candidates which need to be checked for plausibility.
With flow cytometric analyses and treatment of thymocytes with 1C5 the following characteristics of the unknown protein were found.
- Treatment with 1C5 induces apoptosis in thymocytes.
- The unknown protein is LTbetaR-independently regulated during thymocyte development with a difference between the CD4 single-positive and the CD8 single-positive pathway.
- Only a few mature T cells and B cells express the unknown protein. Its expression is upregulated when the cells are activated.

Für die Untersuchungen des Expressionsmusters und der molekularen Mechanismen, die der Aktivierung des Maus Lymphotoxin beta-Rezeptor (mLTbetaR) folgen, wurden vier unterschiedliche monoklonale Ratten-Antikörper gegen diesen Rezeptor, einem Mitglied der TNFR-Superfamilie, hergestellt. Einer dieser Antikörper, 1C5, kreuzreagiert mit einem Protein auf Thymozyten von Wildtyp-Mäusen und LTbetaR-defizienten Mäusen. Da Thymozyten keinen LTbetaR exprimieren, wurde erwartet, einen ähnlichen Rezeptor zu finden, der möglicherweise die Rolle des LTbetaR auf diesen Zellen übernimmt.
Bei der Identifizierung des unbekannten Proteins wurde das Epitop des Antikörpers 1C5 auf die ersten zwölf Aminosäuren des reifen mLTbetaR eingeengt. Kein anderes Mitglied der TNFR-Superfamilie enthält dieses Epitop. Die Suche nach Homologien ergab eine lange Liste von Kandidaten, die auf ihre Plausibilität geprüft werden müssen.
Mittels Durchflußzytometrie und der Behandlung von Thymozyten mit 1C5 wurden folgende Eigenschaften des unbekannten Proteins gefunden:
- Die Behandlung mit 1C5 induziert Apoptose in Thymozyten.
- Während der Thymozyten-Entwicklung wird das unbekannte Protein unabhängig
vom LTbetaR reguliert und zeigt eine unterschiedliche Expression auf CD4
einfach-positiven und CD8-einfach-positiven Thymozyten.
- Nur wenige reife T- und B-Lymphozyten exprimieren das unbekannte Protein.
Diese Expression wird heraufreguliert, wenn diese Zellen aktiviert werden.