In vitro-Charakterisierung stabiler muriner Mausmelanom-Zelllinien mit short hairpin RNA-Knockdown der LDHA

Item type:	Thesis of the University of Regensburg (PhD)
Open Access Type:	Primary Publication
Date:	15 December 2017
Referee:	Prof. Dr. Marina Kreutz
Date of exam:	14 December 2017
Institutions:	Medicine > Lehrstuhl für Innere Medizin III (Hämatologie und Internistische Onkologie)
Keywords:	LDHA, Laktat, shRNA-Knockdown
Dewey Decimal Classification:	600 Technology > 610 Medical sciences Medicine
Status:	Published
Refereed:	Yes, this version has been refereed
Created at the University of Regensburg:	Yes
Item ID:	36298

Abstract (German)

Von unserer Arbeitsgruppe wurden stabile murine Melanomzelllinien mit einem shRNA-Knockdown der LDHA etabliert. Als Kontrollgruppe wurden mit scrambled RNA behandelte Melanomzelllinien etabliert. Die Zellen mit Knockdown der LDHA (Laclo) zeigten eine herabgesetzte Laktatproduktion. In Vorarbeiten wurden von beiden Zelllinien Subklone generiert. Ziel der vorliegenden Arbeit war die ...

Abstract (German)

Von unserer Arbeitsgruppe wurden stabile murine Melanomzelllinien mit einem shRNA-Knockdown der LDHA etabliert. Als Kontrollgruppe wurden mit scrambled RNA behandelte Melanomzelllinien etabliert. Die Zellen mit Knockdown der LDHA (Laclo) zeigten eine herabgesetzte Laktatproduktion. In Vorarbeiten wurden von beiden Zelllinien Subklone generiert. Ziel der vorliegenden Arbeit war die Charakterisierung von den Klonen und Subklonen dieser Zelllinien in vitro. Diese Charakterisierung brachte den Nachweis, dass sich Lachi-Klone von Laclo-Klonen bezüglich Proliferationsverhalten, Oberflächenexpression immunmodulatorischer Antigene, der Genexpression glykolytischer Enzyme und anderer Stoffwechselgene (z.B. IDO1/2, Arginase_1 und 2) nicht unterscheiden. Die Zellen unterscheiden sich jedoch insofern voneinander, als Laclo-Klone mehr Sauerstoff verbrauchen. Unter chemischer Hypoxie reagierten Lachi- und Laclo-Klone mit einer gesteigerten Laktatproduktion und vermehrter Apoptose der Zellen, jedoch reagierten Lachi- und Laclo-Klone ähnlich.
Es wurde also bestätigt, dass es sich bei den Klonen um ein geeignetes Modell handelt, um Tumorzellen mit hoher und geringer Laktatproduktion in vivo zu vergleichen, da sie sich weitgehend durch nichts als ihre Laktatproduktion und ihren Sauerstoffverbrauch unterscheiden. Somit dient diese Arbeit als Grundlage für in vivo Experimente, um den Einfluss von Laktat auf Tumorwachstum und Immunantwort gegen Tumorzellen zu untersuchen.

Translation of the abstract (English)

In preliminary experiments, our research group has established stable murine melanoma cell lines by LDH-A short hairpin RNA technology. The control group has been treated with scrambled RNA technology. A difference between both groups could be measured concerning the production of lactate. In this publication we aim to characterize the cell lines and clones and subclones with high and low lactate ...

Translation of the abstract (English)

In preliminary experiments, our research group has established stable murine melanoma cell lines by LDH-A short hairpin RNA technology. The control group has been treated with scrambled RNA technology. A difference between both groups could be measured concerning the production of lactate. In this publication we aim to characterize the cell lines and clones and subclones with high and low lactate production levels in vitro. We could show that there was no difference between those clones with high or low lactate production concerning proliferation, expression of some immunomodulatory surface antigens and expression of certain genes of glycolytic and few other pathways. It could also be shown that cells with lower lactate production indicated a slightly higher oxygen consumption but chemical hypoxia had a similar effect on both groups. In summary, the cells could be proven as an appropriate model to further investigate the influence of lactate on the immune response against tumor cells for in vivo experiments.

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