In dieser Arbeit habe ich BRAFV600E und NRASQ61K in humanen primären Melanozyten exprimiert, damit den MAP-Kinase-Signalweg aktiviert und die Veränderungen der Zellen mit Hinblick auf Seneszenzentwicklung und Zellmorphologie untersucht. Ich zeige hier, dass die Aktivierung des MAP-Kinase-Signalwegs durch BRAFV600E und NRASQ61K zur zellulären Seneszenz führt. NRASQ61K scheint dabei ein potenterer Seneszenz-Auslöser zu sein als BRAFV600E. In Übereinstimmung damit exprimieren Melanozyten mit der NRASQ61K-Mutante auch signifikant höhere Spiegel des Tumorsuppressors p16INK4a. Darüber hinaus unterscheidet sich die Morphologie von BRAFV600E- und NRASQ61K-exprimierenden Melanozyten deutlich voneinander. NRASQ61K-exprimierende Melanozyten präsentieren einen Seneszenz-typischen Phänotyp (große, plumpe, abgeflachte Zellen), während BRAFV600E-exprimierende Zellen spindelförmig und schlank erscheinen. Nach p16INK4a-Knockout erscheinen NRASQ61K-exprimierende Zellen ebenfalls spindelförmig und schlank, was darauf hinweist, dass die seneszenztypische Zellmorphologie direkt mit dem Vorhandensein von p16INK4a zusammenhängt.

In this study, we overexpressed ongocenic BRAFV600E and NRASQ61K in human melanocytes and thus activated the MAP-kinase pathway. We show that oncogenic activation of the map-kinase pathway leads to cellular senescence. NRASQ61K seems to be a stronger senescence-trigger than BRAFV600E. In accordance with this result, NRASQ61K also causes higher p16INK4a levels than BRAFV600E. Cellular morphology also seems to depend on the activating oncogene: NRASQ61K-overexpression leads to big, flat cells, whereas BRAFV600E-overexpressing cells are lean and spindle-shaped. After knockout of p16INK4, NRASQ61K-expressing melanocytes also appear lean and spindle-shaped, suggesting that p16 INK4a controls the cellular senescence phenotype.