Das Gen icb-1 („induced by contact to basement membrane 1“) ist in Differenzierungsprozesse von Krebszellen involviert und nimmt eine wichtige Rolle in Proliferationsprozessen, Apoptoseverhalten und Progression gynäkologischer Tumore
ein.
In dieser Arbeit wurde ein transienter Knockdown der Expression von icb-1 in der Zelllinie HEC-1B durch Transfektion mit spezifischer siRNA durchgeführt. Der Erfolg und Zeitverlauf des Knockdowns wurde in einem Timecourse Experiment 72h und 96h nach Transfektion auf mRNA Ebene (qPCR) untersucht. Dabei erfolgte der Knockdown im Vergleich zu Zellen, die mit einer negativen Kontroll-siRNA transfiziert wurden. Es wurde anschließend der Effekt des icb-1 Knockdowns auf die relative Zahl viabler Zellen 4 bis 7 Tage nach der Transfektion mit Hilfe eines CTB-Assays untersucht (CellTiter-Blue® Kit, Promega).
Zusammenfassend zeigte sich bei den Proliferationsexperimenten ein signifikant schnelleres Wachstum der icb-1-Knockdown-Zellen im Vergleich zu den Kontrollzellen. Diese Ergebnisse stehen im Einklang mit der zu Beginn postulierten Hypothese, dass icb-1 eine Funktion als Tumorsuppressor ausübt.
Schließlich wurde das Wachstum der mit Östrogen stimulierten icb-1-KnockdownZellen mit den unstimulierten icb-1-Knockdown-Zellen verglichen, um den isolierten Einfluss von Östrogenen auf die Proliferation von icb-1-Knockdown-Zellen zu untersuchen. Hier zeigte sich bei der Versuchsreihe mit 100 Zellen bei Aussaat ein höheres Wachstum bei Knockdown von icb-1 und Stimulation mit Östrogenen. Dies führt zur Vermutung, dass eine verstärkte östrogenabhängige Proliferation der endometrialen Adenokarzinomzellen durch die Expression von icb-1 unterbunden wird.
Schließlich wurde noch die Expression verschiedener Proliferations-assoziierter Gene auf mRNA-Ebene in icb-1-Knockdown-Zellen im Vergleich zu Kontrollzellen
untersucht. Bei Knockdown von icb-1 kam es zu einer erhöhten Genexpression von Cyclin E. Die erhöhte Expression von Cyclin E auf mRNA-Ebene steht dabei im Einklang mit den Ergebnissen der Zellproliferationsassays. Die Ergebnisse dieser Arbeit stützen die Hypothese, dass icb-1 in endometrialen Adenokarzinomzellen eine Funktion als Tumorsuppressorgen ausübt.

The gene icb-1 (“induced by contact to basement membrane 1”) plays an important role in proliferation processes, apoptosis behavior and progression of gynecological tumors
In this work a transient knockdown of the expression of icb-1 in the cell line HEC-1B was established. This was carried out by transfection with specific siRNA. The success and time course of the knockdown was examined 72h and 96h after transfection at mRNA level (qPCR). The knockdown was compared to cells transfected with a negative control siRNA. Then the effect of the icb-1 knockdown on the relative number of viable cells 4 to 7 days after transfection was examined using a CTB assay (CellTiter-Blue® Kit, Promega).
In summary, the proliferation experiments showed a significant faster growth of the icb-1 knockdown cells compared to the control cells. These results are in agreement with the hypothesis postulated at the beginning that icb-1 functions as a tumor suppressor.
Finally, the growth of the estrogen-stimulated icb-1 knockdown cells was compared to the growth of unstimulated icb-1 knockdown cells.
This showed a higher growth of the stimulated icb-1 knockdown cells. This leads to the assumption that an increased estrogen-dependent proliferation of the endometrial adenocarcinoma cells is inhibited by the expression of icb-1.
Finally the expression of various proliferation-associated genes was examined at the mRNA level in icb-1 knockdown cells compared to control cells. When icb-1 was knocked down, there was an increased gene expression of Cyclin E. The increased expression of cyclin E at the mRNA level is consistent with the results of the cell proliferation assays. The results of this work support the hypothesis that icb-1 acts as tumor suppressor gene in endometrial adenocarcinoma cells.