Das BPLF1-Gen des Epstein-Barr-Virus

URN zum Zitieren dieses Dokuments:: urn:nbn:de:bvb:355-opus-1000
DOI zum Zitieren dieses Dokuments:: 10.5283/epub.9943

Schmaus, Susanne

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Veröffentlichungsdatum dieses Volltextes: 01 Aug 2002 13:42

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Dokumentenart:	Hochschulschrift der Universität Regensburg (Dissertation)
Open Access Art:	Primärpublikation
Datum:	0 August 2002
Begutachter (Erstgutachter):	Charalampos Aslanidis
Tag der Prüfung:	12 Juni 2002
Institutionen:	Medizin > Lehrstuhl für Klinische Chemie und Laboratoriumsmedizin Biologie und Vorklinische Medizin
Stichwörter / Keywords:	Epstein-Barr-Virus , Genexpression , Transkription <Genetik> , Translation <Genetik> , , BPLF1 gene , Epstein Barr Virus
Dewey-Dezimal-Klassifikation:	500 Naturwissenschaften und Mathematik > 570 Biowissenschaften, Biologie
Status:	Veröffentlicht
Begutachtet:	Ja, diese Version wurde begutachtet
An der Universität Regensburg entstanden:	Ja
Dokumenten-ID:	9943

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Zusammenfassung (Deutsch)

Der Vermehrungszyklus des Epstein-Barr-Virus (EBV) ist gekennzeichnet durch zwei Aktivitätszustände: Die latente Vermehrung, in der das Virus in bestimmten lymphoiden Zellen des Organismus persistiert und der lytischen Vermehrung, die der Produktion und Freisetzung infektiöser Viruspartikel dient. Um die Rolle des viralen Gens BPLF1 innerhalb der viralen Vermehrungsphase zu untersuchen, sollte die Aktivität und die Expression dieses Gens erstmals analysiert werden. In virusinfizierten Zellen konnten mit Hilfe von RT-PCR und Northernblot-Analysen zwei Gen-spezifische RNA-Transkripte detektiert werden. Neben dem erwarteten Volllängetranskript von 9,5 kBp zeigte sich eine gespleißte, polyadenylierte BPLF1-mRNA mit einer Größe von ca. 3 kBp, trotz fehlender consensus-Spleißstellen. Der Einsatz verschiedener EBV-positiver und EBV-negativer Zelllinien erlaubte die zeitliche Eingrenzung der Transkription auf die späte Phase der Virusvermehrung. Mittels Westernblot-Analysen mit rekombinant hergestelltem BPLF1-Protein als Antigen konnten in verschiedenen menschlichen Seren Antikörper gegen das BPLF1-Protein nachgewiesen werden und damit indirekt die Expression des Proteins in vivo gezeigt werden. Der ausschließliche Nachweis in Seren von Patienten mit starker systemischer Virusvermehrung bestätigte die Klassifizierung des Gens als �spätes Gen�. Für den direkten Nachweis des BPLF1-Proteins wurde durch Immunisierung eines Kaninchens mit rekombinantem BPLF1-Protein ein polyklonales Serum erzeugt. Dieses BPLF1-spezifische Serum erkannte das rekombinante BPLF1-Protein in Western Blot-Untersuchungen. Ein Nachweis des natürlichen Proteins in EBV-positiven Zelllinien bzw. in Viruspartikeln war nicht möglich. Zusammenfassend konnte gezeigt werden, dass BPLF1 eine aktive Rolle in der Vermehrung des EBV spielt. Die experimentellen Daten sowie umfangreiche theoretische Computeranalysen deuteten darauf hin, dass es sich bei BPLF1 möglicherweise um ein Tegumentprotein des Virus handelt.

Übersetzung der Zusammenfassung (Englisch)

The reproduction cycle of the Epstein-Barr virus (EBV) is characterised by two different ways of replication: During latency the virus persists in distinct lymphoid cells of the organism with restricted expression of viral genes. In contrast, during lytic infection infectious virus particles are released. In order to examine the role and function of the BPLF1 gene during replication the expression of the BPLF1 reading frame was analysed. Two gene specific RNA-transcripts were detected by RT-PCR and Northernblot analyses in virus-infected cells. Besides the expected unspliced transcript of 9.5 kbp also a polyadenylated transcript of about 3 kbp was detected, which was obviously derived by splicing of the large hnRNA despite any known consensus splice sites. Using different EBV-positive and EBV-negative cell lines the temporal activity of the BPLF1 gene could be allocated to the late phase of lytic replication. Besides the detection of reading-frame-specific transcripts next expression of the protein product itself was investigated. Therefore, recombinant BPLF1-protein was used as antigen to test human sera with Western blot. These assays demonstrated antibodies against a BPLF1-encoded protein and thus indicated indirectly the expression of the protein in vivo. Only sera of patients with enhanced systemic viral replication showed BPLF1-specific antibodies confirming the previous classification of BPLF1 as a 'late gene'. Finally, for direct detection of the native BPLF1 protein a rabbit was immunized with recombinant BPLF1 protein to yield BPLF1-specific polyclonal antibodies. In Western blot analyses with this serum recombinant BPLF1 protein but no native protein in EBV-positiv cell lines or virus particles could be detected. Finally, we demonstrated that BPLF1 is a functional gene of the Epstein-Barr virus. The experimental data as well as extensive theoretical computer analyses suggested that BPLF1 may be a tegument protein of the virus.

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